組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb (PE Conjuga)輪環(huán)藤寧

β-半糖苷酶Notch1 (5B5) Rat mAb12-冠-4

脫落酸(標(biāo)準(zhǔn)品)TDP43 (G400) Antibody甲基硫代磺酸甲酯

脫落酸(高純)p70 S6 Kinase MCF7 Control Cell Extracts1,2,3,四氫-2-萘

脫落酸,S-誘抗素; 壯芽靈TDP43 (A260) Antibody3,5-二羥基甲

胃蛋白酶(1:3000)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb三銀

核糖核酸酶A(sigma)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb溴吡啶甲酸甲酯

S-4MLANA/MART-1 Antibody5-溴煙酸甲酯

胃蛋白酶(1:12000)Phospho-μ-Opioid Receptor (Ser375) Antibody伯吉斯試劑

蛋白酶K(進(jìn)分)Rabbit IgG Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjuga)哌啶甲酸甲酯

蛋白酶K(Sigma)Phospho-Doublecortin (Ser334) Antibody3,5-二溴-羥基甲

胰凝蛋白酶抑制劑CMTM6 Antibody2-溴-5-羥基甲

亮抑蛋白酶肽(進(jìn)口)Phospho-DRP1 (Ser616) Antibody異煙酸甲酯

胃酶抑素A;抑肽素;胃蛋白酶抑制劑MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb二硫代酸二酯

巖藻糖；L-巖藻糖MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb1-氨基酮鹽酸鹽

果膠酶JMJD3 Antibody7-溴庚酸酯

β-淀粉酶(70萬(wàn)u/ml液體)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb7-氨基庚酸酯鹽酸鹽

β-淀粉酶(酶活5萬(wàn)粉末)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb(1S,2S)-1,2-二基二

環(huán)加氧酶1(COX-1)ELISA試劑盒RNF126  環(huán)指蛋白126500 ul

花生四酸5脂氧合酶(Alox5)ELISA試劑盒RNF148  環(huán)指蛋白148100 ul

花生四酸12-脂氧合酶,白細(xì)胞型(Alox12l/Alox12/Alox15)ELISA試劑盒ROCK1  Rho相關(guān)蛋白激酶120 ul

花生四酸(AA)ELISA試劑盒ROCK2  Rho相關(guān)蛋白激酶2100 ul

紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒RPLP0  酸性核糖體蛋白大亞基P0100 ul

紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒ROS/c ros  活性氧簇ROS100 ul

橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α (sm Actinin-α )ELISA試劑盒RPS6  S6核糖體蛋白100 ul

黑色素細(xì)胞(MC Ab)ELISA試劑盒Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236)  酸化S6核糖體蛋白100 ul

核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)ELISA試劑盒Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser240/244)  酸化S6核糖體蛋白20 ul
豬鏈球菌基因分型PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格F-box蛋白相關(guān)蛋白11抗體Sertaconazole中文名：舍他康唑別名：分子式：C20H15Cl3N2OS

FBXL5蛋白抗體Doxapram hydrochloride mohydrate中文名：鹽酸多沙普侖別名：分子式：C24H33ClN2O3

FBXL12蛋白抗體Depofemin中文名：環(huán)戊丙酸雌二醇別名：分子式：C26H36O3

FBXL3蛋白抗體Quinestrol中文名：炔雌醇環(huán)戊醚別名：分子式：C25H32O2

F-box蛋白相關(guān)蛋白33抗體Tetracaine中文名：丁卡因別名：分子式：C15H24N2O2